Аутоиммунные факторы в механизмах расстройств мозгового кровообращения

Ключевые слова: инсульт, иммунный статус, циркулирующие иммунные комплексы.

Актуальность. Инсульт является наиболее тяжелой и распространенной формой острых нарушений мозгового кровообращения (ОНМК) и основной причиной смертности и инвалидизации населения в экономически развитых странах [1–4].Несмотря на многочисленные научные изыскания в решении вопросов профилактики и лечения инсульта, существенных сдвигов в исходе острой церебральной патологии не наблюдается. Не представляет сомнений, что лечебная тактика острого периода инсульта должна быть патогенетически обоснована, поэтому становится необходимым дополнить ее, воздействуя на биохимические и молекулярные механизмы, участвующие в формировании очагов дисциркуляции.

На сегодняшний день представляет большой интерес изучение аутоиммунных факторов [2] в патогенезе инсульта, учитывая исключительную чувствительность иммунной системы к неблагоприятным факторам внешней и внутренней сред организма [11]. Если аутоиммунные процессы, связанные с атеросклеротической этиологией инфаркта миокарда, хорошо изучены и выявлены антигены, ответственные за их развитие [5–8], то исследования, относящиеся к изучению аутоиммунных процессов при инсульте, особенно обусловленных нарушением функциональной целостности гематоэнцефалического барьера (ГЭБ), находятся на начальной стадии своего развития. Установлено, что осаждение комплекса антиген-антитело в виде циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) [12] на внутренней поверхности сосудов может являться первым звеном в цепи процессов, приводящих к развитию патологических изменений сосудистой стенки, повреждению целостности эндотелия и появлению возможности контакта тромбоцитов с подлежащим слоем коллагена [9,10]. При этом ЦИК в зависимости от их качественных и количественных характеристик могут разнонаправленно модулировать иммунный ответ, вследствие чего либо сохраняется физиологический уровень ЦИК, либо усиливается их образование с развитием патологических реакций, в том числе на уровне сосудистой стенки [5].

Материал и методы. В настоящей работе проведено определение количественного содержания различных субфракций ЦИК в крови у больных ишемическим и геморрагическим инсультом и в контрольной группе практически здоровых лиц, выделение их и идентификация антигенного состава.

Нами было обследовано 20 больных с ОНМК – 10 с ишемическим и 10 с геморрагическим инсультом, находящихся на лечении в Центре ангионеврологии МЦ Наири. Контрольная группа состояла из 12 практически здоровых лиц. ЦИК выделяли модификацией метода осаждения ПЭГ (М6000) [10]. Клинический диагноз определялся на основе анамнестических данных, результатов клинического неврологического обследования и дополнительных параклинических методов (лабораторных данных, допплерографии сосудов мозга, КТ-головного мозга).

Для выделения крупных комплексов в сыворотке добавляли равный объем 7% ПЭГ, в том же буфере (конечная концентрация ПЭГ 3,5%).После инкубации при 40 С в течение 18–20 часов осадок отделяли центрифугированием. Для определения концентрации ЦИК осадок растворяли в 0,1 Н NaOH и определяли оптическую плотность А280. Для идентификации антигенного состава осадок растворяли в T219HCl буфере, рН 8,5 до первоначального объема сыворотки и использовали далее для проведения ЭФ в ПААГ. Выделение мелких ЦИК проводили после предварительного избавления от крупных комплексов осаждением в 3,5% ПЭГ. Альбумины в сыворотке крови и спинномозговой жидкости определяли методом, основанным на специфической хромогенной реакции комплексообразования между бромкрезоловым пурпурным и альбумином человека. Молекулярную массу белков определяли методом ЭФ в ПААГ. ЦИК инкубировали в присутствии додецилсульфата натрия с бета-меркаптоэтаноламином и без него. В додецилсульфате натрия отделяются друг от друга слабосвязанные субъединицы белков, а в бета-меркаптоэтаноламине–субъединицы, связанные дисульфатными ковалентными мостиками. По окончании электрофореза определяли молекулярную массу основных белковых полос, обнаруживаемых в составе ЦИК. Использовали калибровочную кривую, построенную для стандартных белков с известными молекулярными массами, обработанных идентично ЦИК. При калибровке гелей были использованы следующие белковые маркеры: лизацим (14,3 кда), лактальбумин (18,4 кда), трипсиноген (24 кда), яичный альбумин (66 кда), фосфорилаза В (97,4 кда), галактозидаза (1,6 кда), миозин (205 кда).

Для характеристики размеров ЦИК были условно приняты соответствующие обозначения: гигантские, крупные, средние, мелкие. Статистическую обработку проводили по t-критерию Стьюдента.

Результаты и обсуждения. В ходе исследований было выявлено, что при всех формах инсульта уровни субфракций ЦИК повышены, по сравнению с нормой, соответственно в 1,47 и 1,42 раза для гигантских, в 2,1 и 1,78 – для крупных, в 1,66 и 1,57 – для средних и в 1,13 раза – для мелких (табл. 1).

Таблица 1. Концентрация субфракций ЦИК в крови у больных инсультом и контрольной группе

ap=0,06, t<1,99; bp=0, t<1,99; cp=0,0002, t<1,99; dp=0,006, t<1,99;
ep=0,007, t<2,02; fp=0, t<2,01; gp=0,0001, t<2,01; hp=0,039, t<2,01.

Анализ показал достоверное повышение всех субфракций ЦИК как при ишемическом инсульте, так и кровоизлиянии в мозг по сравнению с контрольной группой. При этом оказалось, что при всех формах ОНМК уровень ЦИК различных размеров практически одинаков (p>0,05).

Определение корреляционного коэффициента показало, что уровни гигантских, крупных и средних ЦИК при ишемическом и геморрагическом инсульте очень сильно коррелируются между собой (r>0,9, p<0,05), тогда как ни один из них не коррелирует с уровнем мелких ЦИК. Вышеуказанные результаты могут являться одним из свидетельств вовлечения в патогенез инсульта аутоиммунных процессов. Увеличение концентрации гигантских и крупных ЦИК может быть обусловлено угнетенной иммунореактивностью при указанной патологии и снижением способности элиминировать эти комплексы фагоцитарной системой, в то время как увеличение уровня средних и мелких ЦИК может быть обусловлено избытком антигена.

Известно, что увеличение концентрации ЦИК приводит к нарушению целостности кровеносных сосудов [12]. Очаги воспаления и повреждения тканей мозга, в том числе и нарушения целостности стенки кровеносных сосудов, могут являться зонами нарушения ГЭБ. Нарушение проницаемости ГЭБ приводит к выходу в циркуляцию ранее изолированных антигенов (в частности, антигенов головного мозга), что, в свою очередь, приводит к активации вторичных аутоиммунных процессов и образованию новых иммунных комплексов[6].

Одним из тестов для оценки проницаемости ГЭБ является соотношение альбумин в сыворотке/альбумин в спинномозговой жидкости, поскольку альбумин синтезируется исключительно в печени [13]. Известно, что альбумины в спинномозговой жидкости имеют сывороточное происхождение и увеличение их концентрации может свидетельствовать о нарушении функции ГЭБ. Было обнаружено, что уровень альбумина в сыворотке больных находится в пределах нормы, в то время как его уровень в спинномозговой жидкости значительно повышен по сравнению с нормой.

Интересные результаты были получены при сопоставлении данных по идентификации антигенного состава крупных и мелких ЦИК у больных ишемическим и геморрагическим инсультом [1,2]. Были обнаружены отличия антигенного состава как крупных, так и мелких ЦИК в исследуемых группах больных с ОНМК (табл. 2).

Таблица 2. Антигенный состав ЦИК при ишемическом и геморрагическом инсульте

Полученные данные позволяют сделать следующие выводы:

1. В составе крупных и мелких ЦИК, выделенных из сыворотки больных ишемическим инсультом, обнаруживаются специфические белки с молекулярной массой 213, 95, 76, 74, 65, 48, 47 кда.
2. В составе крупных и мелких ЦИК, выделенных из сыворотки больных геморрагическим инсультом, обнаруживаются специфические белки с молекулярной массой 189,70,62,54,21 кда. Специфичность антигенного состава крупных и мелких ЦИК при различных формах ОНМК дает возможность для установления новых подходов к дифференциальной диагностике инфаркта мозга и кровоизлияния, что представляет определенные трудности в остром периоде инсульта.

Таким образом, полученные данные по достоверному увеличению концентрации различных субфракций ЦИК у больных с ОНМК и идентификация их антигенного состава позволяют с определенностью утверждать, что при исследуемой патологии происходит как угнетение иммунореактивности организма, так и присоединение вторичных аутоиммунных процессов, возможно, обусловленных нарушением целостности ГЭБ. Подобные изменения способны значительно усугубить и утяжелить течение патологического процесса при инсульте. Дальнейшие исследования в этом направлении позволят надеяться на разработку принципиально новых подходов к проблемам ранней диагностики, профилактики и лечения нарушений мозгового кровообращения.

Литература

1. Бакунц Г.О. Иммунный статус организма, система микроциркуляции и липидный гомеостаз у больных с нарушениями мозгового кровообращения. Автореф. дисс. докт. мед. наук. М., 1989, с. 39.
2. Бакунц Г.О., Бояджян А.С., Погосян А.Г., Асатрян Н.Т.,Аракелян А.А., Егиян Л.К. Антигенный состав циркулирующих иммунных комплексов в крови у больных при геморрагических инсультах. Вестник МАНЭБ. 6(42), 2001, СПб., с. 97.
3. Варакин Ю.Я. Инсульт, патогенез, факторы риска, профилактика. Медицинская газета. 1999, URL:http://www.neurol.
4. Gusev E.I., Skvortsova V.I., Izykenova G.A., Alekseev A.A., Dambinova S.A. The level of autoantibodies to glutamate receptors in the blood serum of patients in the acute period of ischemic stroke. Zh. Nevropatol.Psikhiatr. im. S.S. Korsakova,1996, 96, 5,p.68-71.
5. Климов А.Н., Нагорнев В.А., Зубжинский Ю.Н. Кардиология, 12,1983,c.22.
6. Медведева С.Л., Герасимова М.М. Клинико-иммунологические аспекты церебрального инсульта. Ж. Неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова, вып. 9, 2003,с.134.
7. Digeon M., Laver M., Riza J., Bach J.F. Detection of circulating immune complexes in human aorta by simplified assays with polyethylene glycol, J. Immunol. Methods, 1977,16, 2,p.165-183.
8. Newmark J., Newmark H.L., Marden L.A. Antiphospholipid antibodies, ischemic stroke in young adults, and calcium supplementation: a hypothesis,Mil. Med., 2000,165,6,p.489-491.
9. Minick C.J.Ann. N.Y. Acad. Sci., 1976, 275,p.210-227.
10. Minick C.J.In:Immunity and Atherosclerosis.Ed. P. Constatinides, F. Pratesi, C.Cavallero et al., London, 1980, p.111-120.
11. Wick G. Atherosclerosis–an autoimmune disease due to an immune reaction against heat-shock protein 60, Herz, 2000,25,2.p.87-90.
12. Jager L., Herrmann D.Z. Significance of the immune complex reaction in internal medicine, Gesamte Inn. Med.,1980,35,2,p.49-56.
13. Nezlin R.A. A quantitative approach to the determination of antigen in immune complexes, J. Immunol. Methods, 2000,237,p.1-16.

Вопросы, ответы, комментарии